真菌荧光染色液从样本制备到镜检观察的标准化流程如下：

样本制备

皮肤、毛发、指甲样本：先用 75% 乙醇消毒患者皮损或病甲部位。用钝头刀从皮损边缘向外刮取皮屑，鳞屑量少可用透明胶带法取材；从甲变色、萎缩或变脆部位及健甲与病甲交界处取甲屑，伴有甲沟炎患者用棉拭子沾取损害分泌物；用镊子拔除无光泽或毛囊口折断的毛发，尽量保留毛根部。

黏膜样本：口腔黏膜可用钝刀刮片或拭子取材，阴道黏膜可用拭子取材，一般不用浸湿。

痰液样本：取病人清晨漱口后的第一口晨痰，存入无菌痰液容器，用痰液样本处理液液化后离心，取底部沉渣自然干燥固定或火焰固定。

真菌荧光染色液尿液样本：取病人早上第一次清洁尿，用无菌容器收集，离心后取沉渣自然干燥固定或火焰固定。

胸水及其他体液样本：无菌采集于无菌试管中，离心后取沉渣自然干燥固定或火焰固定。

制片

固态样本：将刮取的皮屑、毛发、指甲等固态样本置于载玻片上，体液、血液等液体样本可直接涂抹于载玻片上。

盖片：直接向样本滴加一滴染色液，以覆盖或淹没整个样本为准，盖上盖玻片，使用棉签或纸巾压片，使标本尽量压成薄片，吸去多余染液。

染色

真菌荧光染色液对于深部真菌标本固定后，滴加 1-2 滴真菌 D - 葡聚糖检测荧光染色液后静置反应 1-2 分钟，然后用纯化水轻轻冲洗一下，接着用纸巾轻轻蘸干载玻片上的剩余水液。染色时间根据标本情况而定，一般数秒即可，厚硬组织如指甲等时间应适当延长。

镜检观察

真菌荧光染色液将染色后的玻片置于荧光显微镜下，使用 40x 物镜观察样本。观察到发蓝色荧光的孢子或菌丝即可报告真菌阳性，无真菌荧光物出现即为真菌阴性。